http://www.abbs.info e-mail:[email protected]

ISSN 0582-9879                     ACTA BIOCHIMICA et BIOPHYSICA SINICA 2003, 35(9): 829-833 CN 31-1300/Q

XBP-1 Enhances the Transcriptional Activity of Estrogen Receptor α

DING Li-Hua^1,2, YE Qi-Nong¹*, ZHU Jian-Hua¹, YAN Jing-Hua¹, ZHONG Hong-Jun¹, WANG Zong-Hua², HUANG Cui-Fen¹

( ¹Beijing Institute of Biotechnology, Beijing 100850, China; 2College of Life Sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China )

Abstract The estrogen receptor (ERα) is a member of a large superfamily of nuclear receptors that regulates the transcription of estrogen-responsive genes. Several recent studies have demonstrated that human X-box binding protein 1 (XBP-1) mRNA expression is associated with ERα status in breast tumors. More recently, two forms of XBP-1 were identified due to their unique splicing. The two splicing variants of XBP-1 were designated XBP-1S and XBP-1U, respectively. In this study, the coding sequences of XBP-1S and XBP-1U were cloned respectively into the expression vector pcDNA3 harboring FLAG epitope, generating the recombinant plasmids pcDNA3-FLAG-XBP-1S and pcDNA3-FLAG-XBP-1U. Western blot analysis showed that both XBP-1S and XBP-1U were expressed in mammalian cells. To determine the effects of XBP-1S and XBP-1U on the transcriptional activity of ERα, MDA-MB-231 breast cancer cells were cotransfected with the expression vectors for ERα and either pcDNA3-FLAG-XBP-1S or pcDNA3-FLAG-XBP-1U. The results indicated that XBP-1S and XBP-1U enhanced ERα-mediated transcriptional activities in a hormone-independent manner. GST pull-down assay showed that both XBP-1S and XBP-1U interacted with ERα. These data suggest that XBP-1S and XBP-1U may play an important role in breast cancer growth and progression through ERα signaling.

Key words estrogen receptor; X-box binding protein 1; transcriptional activity

XBP-1能提高雌激素受体ERα的转录活性

丁丽华^1,2 叶棋浓^1* 朱建华¹ 严景华¹ 钟红君¹ 王宗华² 黄翠芬¹

（1军事医学科学院生物工程研究所， 北京 100850； 2福建农林大学生命科学学院， 福州 350002）

摘要 雌激素受体(ERα)是一种核受体， 调节与雌激素有关的基因转录， 在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用。 在乳腺癌中， 人X盒结合蛋白1(XBP-1)与ERα共表达， 并在一些乳腺肿瘤中过表达。 最近发现XBP-1有两种剪切形式， 即XBP-1S和XBP-1U， 但它们在ERα信号途径中的作用还不清楚。 分别将XBP-1S和XBP-1U编码序列克隆至带有FLAG标签的pcDNA3载体中， 构建成pcDNA3-FLAG-XBP-1S和pcDNA3-FLAG-XBP-1U重组质粒。 Western 印迹分析表明， 该两种XBP-1形式在哺乳动物细胞中都得到了表达。 XBP-1的两种剪切形式的重组质粒分别和ERα表达载体共转染乳腺癌细胞MDA-MB-231， 检测该两种剪切形式对ERα转录活性的影响。 结果表明， XBP-1S和XBP-1U以激素不依赖的形式提高ERα的转录活性。 GST沉淀实验表明， XBP-1S和XBP-1U均能与ERα结合。 这些结果提示， XBP-1S和XBP-1U可能通过影响ERα信号途径在乳腺癌的发生发展中起重要作用。

关键词 雌激素受体; X盒结合蛋白1（XBP-1）; 转录活性

雌激素受体(ERα)基因含有8个外显子， 其编码的蛋白质分A/B、C、D、E和F五个功能区， 包括AF1和AF2两个转录激活结构域。 ERα是一种配体（激素）依赖的转录因子， 配体结合到ERα的配体结合区后， 促使它和另一ERα分子形成二聚体， 该二聚体与靶基因启动子区中的雌激素反应元件（ERE）结合， 在一系列与ERα结合的共激活子和共抑制子作用下， 激活靶基因转录 ［1］。 ERα的激活引发许多生物学效应， 如细胞生长、有丝分裂、程序性死亡［2， 3］等。

人X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1， XBP-1)与靶基因启动子序列中的X盒结合， 故称为X盒结合蛋白1。 XBP-1是一个碱性亮氨酸拉链（bzip）蛋白 ［4］， 是CREB/ATF转录因子家族中的一员。 XBP-1在成人组织中广泛存在。 在胚胎期， XBP-1主要在外分泌腺体、成骨细胞、成软骨细胞和肝脏中表达［4， 5］。 在人多骨髓瘤细胞中， XBP-1在恶性浆细胞分化中具有重要作用［6］。 10年前， 科学家们已克隆得到XBP-1［4］， 并一直认为只存在一种形式， 即XBP-1U。 最近发现， 在内质网应激时［7， 8］， XBP-1U mRNA由I型跨膜蛋白激酶/核糖核酸内切酶（type I transmembrane protein kinase/ endoribonuclease,IRE1）剪切产生另外一种形式， 即XBP-1S。 这种新的形式具有很高的转录活性， 激活哺乳动物的未折叠蛋白质应答（UPR）。 这种不规范的剪切形式在XBP-1的165位氨基酸残基处产生移码突变。 因此， XBP-1U和XBP-1S分别由260和376个氨基酸组成， N端具有相同的bzip结构域。

基因芯片和SAGE技术表明， 在乳腺癌中， ERα与XBP-1共表达［9～14］， 在一些乳腺肿瘤中， XBP-1 mRNA表达水平上升。 由于ERα在乳腺癌的发生、发展中具有重要作用， 因此研究XBP-1对ERα转录活性的影响可能为乳腺癌的治疗提供新的治疗靶标。 本实验克隆得到了XBP-1的两种剪切形式， 检测了这两种剪切形式对ERα转录活性的影响， 为进一步研究XBP-1和ERα在乳腺癌中的作用打下了基础。

1 材料和方法(Materials and Methods)

1.1 质粒和细胞株

pERE-LUC质粒， 为含雌激素反应元件（ERE）的荧光素酶报告基因， 由TSAI Ming-jer博士（Baylor College of Medicine）赠送。 人ERα表达载体pcDNA3-ER根据文献［15］的方法构建。 乳腺癌细胞株MDA-MB-231由LEDER Philip 和 ZHOU Fen博士（Harvard Medical School）赠送。 SV40转化的293T肾细胞由本室保存。

1.2 细胞和细胞培养

293T 和MDA-MB-231细胞分别采用含10%胎牛血清的RPMI1640和DMEM培养基于37 ℃、5%CO2培养箱内常规培养。
1.3 抗体

抗FLAG的单克隆抗体购自Sigma公司。 辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠IgG购自Vector公司。
1.4 分子生物学试剂

各种分子生物学试剂分别购自NEB、Qiagen、Vector及Invitrogen等公司。
1.5 重组质粒的构建

分别构建pcDNA3-FLAG-XBP-1S和pcDNA3-FLAG-XBP-1U重组质粒。 以卵巢双杂交cDNA文库(Clontech公司产品)为模板， 以P1(5′-CGGGATCCATGGTGGTGGTGGCAG-3′)和P2(5′-CCGCTC-GAGTTAGACACTAATCAGCTGG-3′)为引物， PCR扩增XBP-1S。 以BamHI和XhoI双酶切PCR产物， 将PCR产物插入到同样双酶切的pcDNA3-FLAG载体中， 即得重组质粒pcDNA3-FLAG-XBP-1S。 为克隆XBP-1U， 首先利用重组PCR技术获得XBP-1U的全长编码区序列。 即以P3(5′-CGGGATCCATGGTGGTGGTGGCAGCCG-3′)和P4(5′-CACCTGCTGCAGAGGTGCACGTAGTCTGAGTGCTGCGGACTCAG-CAG-3′)为引物， 以pcDNA3-FLAG-XBP-1S为模板， PCR扩增XBP-1U片段1， 以P5(5′-CTACGTGCACCTCTGCAGCAGGTGCAGGCCCAGTTGTCAC-3′)和P6(5′-CCGCTCGAGTTAGTTCATTAATGGCTTCCAG-3′)为引物， 以pcDNA3-FLAG-XBP-1S为模板， PCR扩增XBP-1U片段2。 再以P3和P6为引物， 以片段1和2为模板， PCR扩增XBP-1U全长编码区序列。 PCR产物经BamHI和XhoI双酶切后连接到经同样酶切的pcDNA3-FLAG载体中， 即得到重组质粒pcDNA3-FLAG-XBP-1U。

上述克隆所用PCR扩增条件均为: 94 ℃变性1 min后， 按以下参数进行25次循环：94 ℃变性1 min， 55 ℃复性1 min， 72 ℃延伸2 min。 最后72 ℃延伸7 min。 PCR扩增所用酶为目前保真度最高的pfu DNA聚合酶。 所有重组质粒经T7和SP6通用引物测序。
1.6 哺乳动物细胞的转染

在转染前24 h， 用含100 g/L葡聚糖包裹的活性碳（DCC）处理的胎牛血清和无酚红的RPMI1640培养基将细胞接种在12孔板中(Costar公司产品)。 接种细胞密度以转染时细胞密度达90%为准。 将总量为1.0 μg DNA与80 μl RPMI1640培养基混合， 再将2.5 μl LipofectamineTM2000与80 μl RPMI1640培养基混合， 然后将上述两种溶液混合， 室温放置20 min， 加入到含有800 μl RPMI1640和10%胎牛血清的12孔板中。 转染4 h后加10 nmol/L雌激素（溶于无水乙醇中）， 对照加无水乙醇。
1.7 Western 印迹分析

293T细胞转染24 h后， 收集细胞， 加入SDS加样缓冲液， 煮沸10 min， 离心后取上清液进行SDS-PAGE， 电泳结束后转移至硝酸纤维素膜上， 用50 g/L脱脂奶粉4 ℃封闭过夜， 然后用50 g/L脱脂奶粉稀释的抗FLAG单克隆抗体室温轻摇1 h， TBST洗膜3次， 每次7 min， 加入用50 g/L脱脂奶粉稀释的辣根过氧化物酶偶联的羊抗鼠IgG， 室温轻摇1 h， TBST洗膜3次， 每次7 min， 用鲁米诺（luminol）和过氧化物（peroxide）(Pierce公司)各1 ml混匀,加到硝酸纤维素膜上反应5 min， 压片显影。
1.8 荧光素酶和β-半乳糖苷酶活性测定

荧光素酶活性测定基本按Promega公司说明书进行。 雌激素或无水乙醇处理转染细胞24 h后， 吸掉培养基， 用PBS洗1次， 加入160 μl 裂解缓冲液， 室温轻摇15 min， 刮下细胞， 收集到1.5 ml离心管中， 震荡5 min， 4 ℃， 12 000 r/min离心3 min， 收集上清液， 取10 μl用荧光计测量荧光素酶活性。
用ONPG测β-半乳糖苷酶活性。 上述50 μl上清液与450 μl Z缓冲液/β-巯基乙醇溶液混合， 加入100 μl ONPG， 30 ℃温育， 直到出现浅黄色为止， 加入250 μl浓度为1 mol/L Na2CO3终止颜色反应， 在波长420 nm下测定样品A值。
1.9 ERα转录活性的测定

MDA-MB-231细胞转染4 h后， 加10 nmol/L雌激素（溶于无水乙醇中）， 对照加无水乙醇。 24 h后,利用荧光素酶测定ERα转录活性。 每一转染实验中， 同时转染荧光素酶报告基因ERE-LUC(0.2 μg)﹑表达β-半乳糖苷酶的质粒(0.1 μg)、ERα表达载体和XBP-1两种不同剪切形式的重组质粒。 β-半乳糖苷酶报告基因用于校正细胞转染效率。 转录激活活性为细胞转染效率校正后的荧光素酶活性。
1.10 GST-ERα融合蛋白在大肠杆菌中的表达

将表达谷胱甘肽S转移酶-ERα（GST-ERα）融合蛋白的重组质粒pGST-ERα (由本室保存)和表达GST的空载体pGEX-KG（Pharmacia公司）转化到大肠杆菌DH5α中。 转化子37 ℃振荡过夜,再按2 %的接种量转接， 30 ℃培养6 h后， 加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L， 20 ℃继续诱导培养过夜。 收集上述诱导菌， 基本按Pharmacia公司说明书进行， 利用谷胱甘肽可结合GST的特点， 用谷胱甘肽-Sepharose 4B小颗粒纯化GST融合蛋白。 即按10∶1的比例加入细胞裂解液， 超声破碎， 离心收集上清液， 加入适量谷胱甘肽-Sepharose 4B小颗粒， 结合3 h。 再收集谷胱甘肽-Sepharose 4B小颗粒， 充分洗脱未结合蛋白质后， 即得到结合有GST-ERα融合蛋白或GST蛋白的谷胱甘肽-Sepharose 4B小颗粒。
1.11 GST沉淀（pull-down）实验

按Promega公司说明书进行体外翻译。 取40 μl TnT T7 Quick master Mix， 2 μl ［35S］-甲硫氨酸, 2 μg pcDNA3-FLAG-XBP-1S和pcDNA3-FLAG-XBP-1U重组质粒， 加水至总体积50 μl， 混合后30 ℃水浴1 h， 得到35S标记蛋白质XBP-1S和XBP-1U。 在0.5 ml结合缓冲液（50 mmol/L Tris-HCl pH 7.5, 150 mmol/L NaCl, 1 mmol/L EDTA, 0.3 mmol/L DTT, 0.1% NP-40及蛋白酶抑制剂）中加入上述同位素标记蛋白质和10 μl 结合有GST-ERα融合蛋白或GST蛋白的Sepharose 4B小颗粒在4 ℃下反应过夜。 用上述结合缓冲液洗涤小颗粒4次， 每次30 min。 用15 μl SDS加样缓冲液煮沸洗涤后的小颗粒进行SDS-PAGE， 放射自显影检测与ERα结合的蛋白质。
1.12 统计学分析

用双尾t检验计算P值。

2 结果(Results)

2.1XBP-1两种剪切形式重组质粒的构建

为了构建XBP-1表达载体， 分别将XBP-1S和XBP-1U全长编码区序列克隆到带有FLAG标签的pcDNA3载体中。 按材料和方法中所述构建XBP-1两种剪切形式的重组质粒pcDNA3-FLAG-XBP-1S和pcDNA3-FLAG-XBP-1U。 经BamHI和XhoI酶切鉴定， 分别得到约1100 bp和780 bp的外源DNA插入片段(图1)， 而空载体pcDNA3-FLAG经同样酶切后无插入片段， 说明克隆成功。 重组质粒经序列测定证明， XBP-1S和XBP-1U编码区序列完全正确（数据略）。

Fig.1 Restriction analysis of recombinant plasmids

All of the recombinant plasmids were digested with BamHI and XhoI. M, DNA marker; 1, pcDNA3-FLAG; 2, pcDNA3-FLAG-XBP-1S； 3, pcDNA-FLAG-XBP-1U.

2.2 XBP-1两种剪切形式在哺乳动物细胞中的表达

如材料和方法中所述， 空载体、pcDNA3-FLAG-XBP-1S和pcDNA3-FLAG-XBP-1U重组质粒分别转染293T细胞， 收集细胞总蛋白质进行SDS-PAGE， 用FLAG抗体进行Western 印迹分析。 结果表明（图2）， pcDNA3-FLAG-XBP-1S在真核细胞中表达了分子量约50 kD的蛋白质， pcDNA3-FLAG-XBP-1U表达了分子量约35 kD的蛋白质， 而空载体无蛋白质条带， 与预期结果相同。

Fig.2 Western blotting showing XBP-1S and XBP-1U protein levels in 293T cells

Whole-cell extracts were prepared, and equivalent amounts of each extract were probed with anti-FLAG antibody.1, 293T cells were transfected with 0.5 μg pcDNA3; 2, 293T cells were transfected with 0.5 μg expression vector XBP-1S; 3, 293T cells were transfected with 0.5 μg expression vector XBP-1U.

Fig.3 XBP-1S and XBP-1U enhance ERα -mediated transcription activation in MDA-MB-231 cells

Cells were cotransfected with 0.2 μg of ERE-LUC, 50 ng of the expression plasmid for ERα, 0.1 μg β-gal expression vector and 0.5 μg expression vectors for either XBP-1S or XBP-1U as indicated. Cells were then treated with control vehicle (0.1% ethanol) or 10 nmol/L 17β-estradiol (E2) for 24 h before luciferase assay. The LUC activity obtained on transfection of ERE-LUC and ERα without exogenous XBP-1S and XBP-1U in the absence of E2 was set as 1. Results are expressed as ± s for three independent experiments.

2.3 转录活性的测定

利用ERα能与ERE一致序列结合的特点， 选用含雌激素反应元件的荧光素酶（ERE-LUC）作为报告基因， 通过检测荧光素酶活性测定ERα的转录激活功能。 如图3所示， 在乳腺癌细胞MDA-MB-231中， 与空载体比较， 在不存在雌激素情况下， 转染pcDNA3-FLAG-XBP-1S和 pcDNA3-FLAG-XBP-1U细胞的ERE-LUC活性分别约为转染空载体时的3.0倍（P<0.05）和1.5倍（P<0.05）。 在雌激素E2诱导下， pcDNA3-FLAG-XBP-1S和 pcDNA3-FLAG-XBP-1U使ERE-LUC活性分别增加到约11倍和6倍， 而空载体pcDNA3-FLAG在同样条件下的ERE-LUC活性只为5.2倍（P<0.05）。 因此， 不管有无激素存在， XBP-1S和XBP-1U均能使ERα的活性提高。
2.4 ERα分别与XBP-1S和XBP-1U的相互作用

利用体外转录和翻译偶联的方法， XBP-1S和XBP-1U得到了成功翻译和35S标记（图4， input）。 将GST-ERα纯化蛋白或GST分别与XBP-1S和XBP-1U混合后进行GST沉淀（pull-down）实验。 结果表明（图4）， XBP-1S和XBP-1U均能与GST-ERα结合， 而阴性对照GST不能结合XBP-1S和XBP-1U， 说明XBP-1S和XBP-1U能特异结合ERα。

Fig.4 Interaction of XBP-1S and XBP-1U with ERα in vitro

GST pull-down assay was performed as described under “Materials and Methods”. Full-length GST-ERα fusion proteins, immobilized on beads, were mixed with in vitro translation reaction mixtures of XBP-1S or XBP-1U as indicated. The bound proteins were subjected to SDS-polyacrylamide gel electrophoresis followed by autoradiography. 1, 10% input; 2, GST; 3, GST-ERα; 4, 10% input; 5, GST; 6, GST-ERα.

3 讨论(Discussion)

基因芯片和SAGE技术表明， 在乳腺癌中， XBP-1与ERα共表达［9～14］， 在一些乳腺肿瘤中过度表达［16］， 但XBP-1在ERα信号途径中的作用还不清楚。 我们发现， XBP-1能提高ERα的转录活性。

ERα调节靶基因的表达需要配体的结合、磷酸化、共辅助因子的相互作用［17～20］。 已经发现ERα与许多共辅助因子相互作用， 包括共激活子和共抑制子［21］。 共激活子包括SRC家族［22］、CBP/P300［23， 24］、P68［25］、ARA70［26］等。 它们以配体依赖的形式提高ERα的转录活性。 除了存在配体依赖的调节方式外， ERα还可被多巴胺、生长因子等［27］磷酸化， 从而提高其转录活性。

细胞周期蛋白D1是第一个发现与ERα相互作用并提高ERα转录活性的激素不依赖的共激活子［28～30］。 我们的结果表明， XBP-1S和XBP-1U能以激素不依赖的方式增强ERα转录活性， 且XBP-1S和XBP-1U均能在体外结合ERα,提示XBP-1S和XBP-1U可能是第二个激素不依赖的ERα共激活子。 XBP-1S和XBP-1U在体内是否与ERα相互作用有待于进一步研究。 妇女绝经后， 雌激素水平降低， 另外， 有些妇女在绝经前雌激素水平也可能较低。 在这些情况下， 激素不依赖的共激活子可能发挥重要的生理和病理作用。 由于XBP-1在一部分乳腺癌病人中过表达， 因此， XBP-1可能通过ERα信号途径影响乳腺癌的发生发展。

References

1 Heery DM, Kalkhoven E, Hoare S, Parker MG. A signature motif in transcriptional co-activators mediates binding to nuclear receptors. Nature, 1997, 387(6634): 733－736

2 Katzenellenbogen BS. Estrogen receptors: Bioactivities and inter-actions with cell signaling pathways. Biol Reprod, 1996, 54(2): 287－293

3 Katzenellenbogen BS, Montano MM, Ekena K, Herman ME, Mc-Inerney EM. Antiestrogens: Mechanisms of action and resistance in breast cancer. Breast Cancer Res Treat, 1997, 44(1): 23－38

4 Liou HC, Boothby MR, Finn PW, Davidon R, Nabavi N, Zeleznik-Le NJ, Ting JP et al. A new member of the leucine zipper class of proteins that binds to the HLA DR alpha promoter. Science, 1990 , 247(4950): 1581－1584

5 Clauss IM, Gravallese EM, Darling JM, Shapiro F, Glimcher MJ, Glimcher LH. In situ hybridization studies suggest a role for the basic region-leucine zipper protein hXBP-1 in exocrine gland and skeletal development during mouse embryogenesis. Dev Dyn, 1993, 197(2): 146－156

6 Reimold AM, Iwakoshi NN, Manis J, Vallabhajosyula P, Szomolanyi-Tsuda E, Gravallese EM, Friend D et al. Plasma cell differentiation requires the transcription factor XBP-1. Nature, 2001， 412(6844): 300－307

7 Yoshida H, Matsui T, Yamamoto A, Okada T, Mori K. XBP1 mRNA is induced by ATF6 and spliced by IRE1 in response to ER stress to produce a highly active transcription factor. Cell, 2001, 107(7): 881－891

8 Calfon M, Zeng H, Urano F, Till JH, Hubbard SR, Harding HP, Clark SG et al. IRE1 couples endoplasmic reticulum load to secretory capacity by processing the XBP-1 mRNA. Nature, 2002, 415(6867): 92－96

9 Perou CM, Sorlie T, Eisen MB, van de Rijn M, Jeffrey SS, Rees CA, Pollack JR et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature, 2000, 406(6797): 747－752

10 van't Veer LJ, Dai H, van de Vijver MJ, He YD, Hart AA, Mao M , Peterse HL et al. Gene expression profiling predicts clinical outcome of breast cancer. Nature, 2002, 415(6871): 530－536

11 Bertucci F, Houlgatte R, Benziane A, Granjeaud S, Adelaide J, Tagett R, Loriod B et al. Gene expression profiling of primary breast carcinomas using arrays of candidate genes. Hum Mol Genet, 2000, 9(20): 2981－2991

12 Bertucci F, Nasser V, Granjeaud S, Eisinger F, Adelaide J, Tagett R, Loriod Bet al. Gene expression profiles of poor-prognosis primary breast cancer correlate with survival. Hum Mol Genet, 2002, 11(8): 863－872

13 Iwao K, Matoba R, Ueno N, Ando A, Miyoshi Y, Matsubara K, Noguchi S et al. Molecular classification of primary breast tumors possessing distinct prognostic properties. Hum Mol Genet, 2002, 11(2): 199－206

14 West M, Blanchette C, Dressman H, Huang E, Ishida S, Spang R, Zuzan H et al. Predicting the clinical status of human breast cancer by using gene expression profiles. Proc Natl Acad Sci USA, 2001, 98(20): 11462－11467

15 Ye Q, Chung LW, Cinar B, Li S, Zhau HE. Identification and characterization of estrogen receptor variants in prostate cancer cell lines. J Steroid Biochem Mol Biol, 2000, 75(1): 21－31

16 Porter DA, Krop IE, Nasser S, Sgroi D, Kaelin CM, Marks JR, Riggins G et al. A SAGE (serial analysis of gene expression) view of breast tumor progression. Cancer Res, 2001, 61(15): 5697－5702

17 Robyr D, Wolffe AP, Wahli W. Nuclear hormone receptor coregulators in action: Diversity for shared tasks. Mol Endocrinol, 2000, 14(3): 329－347

18 Schapira M, Raaka BM, Samuels HH, Abagyan R. Rational discovery of novel nuclear hormone receptor antagonists. Proc Natl Acad Sci USA, 2000, 97(3): 1008－1013

19 Weigel NL. Steroid hormone receptors and their regulation by phosphorylation. Biochem J, 1996, 319( Pt 3): 657－667

20 Su LF, Knoblauch R, Garabedian MJ. Rho GTPases as modulators of the estrogen receptor transcriptional response. J Biol Chem, 2001, 276(5): 3231－3237
21 Klinge CM. Estrogen receptor interaction with co-activators and co-repressors. Steroids, 2000, 65(5): 227－251

22 Xu L, Glass CK, Rosenfeld MG. Coactivator and corepressor complexes in nuclear receptor function. Curr Opin Genet Dev, 1999, 9(2): 140－147

23 Chakravarti D, LaMorte VJ, Nelson MC, Nakajima T, Schulman IG, Juguilon H, Montminy M et al. Role of CBP/P300 in nuclear receptor signalling. Nature, 1996, 383(6595): 99－103

24 Yao TP, Ku G, Zhou N, Scully R, Livingston DM. The nuclear hormone receptor coactivator SRC-1 is a specific target of p300. Proc Natl Acad Sci USA, 1996, 93(20): 10626－10631

25 Endoh H, Maruyama K, Masuhiro Y, Kobayashi Y, Goto M, Tai H, Yanagisawa J et al. Purification and identification of p68 RNA helicase acting as a transcriptional coactivator specific for the activation function 1 of human estrogen receptor alpha. Mol Cell Biol, 1999, 19(8): 5363－5372

26 Alen P, Claessens F, Schoenmakers E, Swinnen JV, Verhoeven G, Rombauts W, Peeters B. Interaction of the putative androgen receptor-specific coactivator ARA70/ELE1 alpha with multiple steroid receptors and identification of an internally deleted ELE1beta isoform. Mol Endocrinol, 1999, 13(1): 117－128

27 Weigel NL, Zhang Y. Ligand-independent activation of steroid hormone receptors. J Mol Med, 1998, 76(7): 469－479

28 Zwijsen RM, Wientjens E, Klompmaker R, van der Sman J, Bernards R, Michalides RJ. CDK-independent activation of estrogen receptor by cyclin D1. Cell, 1997, 88(3): 405－415

29 Neuman E, Ladha MH, Lin N, Upton TM, Miller SJ, DiRenzo J, Pestell RG et al. Cyclin D1 stimulation of estrogen receptor transcriptional activity independent of cdk4. Mol Cell Biol, 1997, 17(9): 5338－5347

30 Lamb J, Ladha MH, McMahon C, Sutherland RL, Ewen ME. Regulation of the functional interaction between cyclin D1 and the estrogen receptor. Mol Cell Biol, 2000, 20(23): 8667－8675

_______________________________________

Received: April 14, 2003 Accepted： June 6, 2003

This work was supported by a grant from the National Natural Science Fundation of China (No.30170039)

*Corresponding author： Tel, 86-20-84112504; Fax, 86-20-84113964; e-mail, [email protected]